Corredo rapido di rilevazione dell'antigene dell'intero sangue, corredo domestico della prova dell'antigene 150-250ul

Con lo strumento medico di IVD per fare il corredo rapido di neutralizzazione della prova dell'anticorpo SARS-CoV-2

Corredo di neutralizzazione della prova di Fluerescent dell'anticorpo & prova rapida di neutralizzazione dell'anticorpo

L'analisi dineutralizzazione dell'anticorpo è stata eseguita come precedentemente ha descritto (5). Brevemente, le cellule di Vero sono state seminate in 96 piatti buoni per produrre uno strato monomolecolare ai tempi dell'infezione. Gli importi di Pretitrated di rVSV-SARS-Cov-2 [phCMV3-SARS-CoV-2 la punta SARS-CoV-2-pseduotyped VSV-ΔG-GFP (proteina fluorescente verde) è stata generata transfecting le cellule di HEK293T, l'atcc CRL-3216] sono stati incubati con plasma umano in serie diluito a 37°C per 1 ora prima dell'aggiunta agli strati monomolecolari della cellula confluenti di Vero (atcc CCL-81) in 96 piatti buoni. Le cellule sono state incubate per 12 - 16 ore a 37°C in 5% CO2.Le cellule poi sono state riparate in paraformaldeide di 4%, macchiato con 1 μg/ml Hoechst ed imaged facendo uso di un toner di CellInsight CX5 per quantificare il numero totale delle cellule che esprimono GFP. L'infezione è stata normalizzata al numero medio delle cellule infettate con rVSV-SARS-CoV-2 ha incubato con plasma umano normale. Il LOD è stato stabilito As <1:20 on="" the="" basis="" of="" plasma="" samples="" from="" a="" series="" of="" unexposed="" control="" subjects=""> 50(i titoli di concentrazione inibitoria mediana) sono stati calcolati facendo uso di regressione di misura LogIC50 del Un-sito in prisma 8,0 di GraphPad.

Ad un'analisi basata a fluorescenza di neutralizzazione di alto-capacità di lavorazione

Per colmare dentro la lacuna per la sierodiagnosi COVID-19 e la valutazione del vaccino, abbiamo sviluppato ad un'analisi basata a fluorescenza che rapidamente ed attendibilmente misura la neutralizzazione di un reporter SARS-CoV-2 dagli anticorpi dagli esemplari pazienti. L'analisi è stata sviluppata su una stalla mNeonGreen (mNG) SARS-CoV-2 dove il gene del mNG è stato costruito al ORF7 del genoma virale (fig. 1a)10. La sequenza completa di mNG SARS-CoV-2 è descritta nella fig. supplementare. 1. La figura 1b descrive il diagramma di flusso dell'analisi di neutralizzazione del reporter in un formato buono 96. Il protocollo di analisi è dettagliato nei metodi supplementari. Brevemente, i sieri pazienti in serie sono stati diluiti ed incubato stati con il virus del reporter. Dopo incubazione a 37°C per 1   h, le cellule di Vero CC-81 (pre-seminate in un piatto buono 96) sono state infettate con le miscele siero/del virus ad una molteplicità di infezione (MOI) di 0,5. Ad un'post-infezione di 16   h, le cellule mNG-positive sono state quantificate facendo uso di un lettore della rappresentazione del alto-contenuto (fig. 1b). Dovrebbe essere notato che le cellule di Vero CC-81, non cellule di Vero E6, sono state scelte per il mNG analizzano per permettere alla quantificazione accurata delle cellule fluorescenti. Sessanta esemplari del siero COVID-19 dai pazienti RT-PCR-confermati e 60 dai campioni del siero non-COVID-19 (archivati prima dell'emergenza COVID-19) sono stati analizzati facendo uso del virus del reporter. Per gli esemplari di qualche COVID-19-positive, il positivo postvirale dei giorni RT-PCR della raccolta del campione era disponibile ed è indicato in Tabella Table1.1. Dopo l'infezione virale del reporter, le cellule hanno girato il verde in assenza del siero (fig. 1c, del pannello inferiore); al contrario, l'incubazione del virus del reporter con il siero paziente COVID-19 ha fatto diminuire il numero delle cellule fluorescenti (pannello superiore). Una curva di reazione al dosaggio è stata ottenuta fra il numero delle cellule fluorescenti ed il popolare di diluizione del siero (fig. 1d e fig. supplementare. 2), che ha tenuto conto la determinazione del popolare di diluizione che ha neutralizzato 50% delle cellule fluorescenti (NT50). L'analisi del reporter rapidamente ha diagnosticato 120 esemplari all'interno di 24   h: tutti e 60 i COVID-19 sieri (esemplari 1-60) hanno mostrato NT positivo50di 35 - 5711 e di tutti e 60 i non-COVID-19 sieri (esemplari 61-120) ha mostrato NT negativo50 <20>di 1).

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